بررسی اثر بیش بیان ژن sox2 در دگر تمایز سلول های رنگدانه دار شبکیه (rpe) به سلول های عصبی شبکیه

هدف: سلول های اپی تلیالی رنگدانه دار شبکیه (rpe ) یک لایه سلول رنگدانه دار در درونی ترین لایه شبکیه تشکیل می دهند. این سلول ها توانایی باز برنامه نویسی و در نتیجه تولید سلول های پیش ساز شبکیه را دارند. sox2 یک فاکتور رونیسی و یک مارکر مهم برای سلول های پیش ساز عصبی و سلول های بنیادی می باشد و سبب حفظ خاصیت پر توانی سلول های بنیادی می شود. هدف از این مطالعه تولید سلول های پیش ساز عصبی به وسیله بیش بیان ژن sox2 در سلول های rpe بوده است. مواد و روش ها: سلول های rpe از کره چشم انسان جدا شده و در محیط dmem/f12 همراه با 20% از fbs کشت داده شدند، در پاساژهای بعدی این سلول ها در محیط dmem/f12 همراه با 10% fbs کشت داده می شدند. ژن sox2 در وکتور لنتی ویروسی plex-mcs کلون گردید و به وسیله هضم آنزیمی، pcr و تعیین توالی، صحت کلونینگ مورد تایید قرار گرفت. وکتور plex-mcs sox2 به همراه وکتورهای کمکی با روش کلسیم فسفات به سلول های hek293t ترنسفکت گردید. این سلول ها ویروس را به محیط آزاد کرده و ویرس ها از محیط جمع آوری گردیدند. سلول های rpe با این ویروس ها آلوده گشته و پس از 96 ساعت با آنتی بیوتیک پرومایسین با غلظت µg/ml 7/0 مورد تیمار قرار گرفتند. پس از 72 ساعت سلول های آلوده گشته زنده مانند. بیان مارکرهای سلول های پروژنیتور مانند pax6، chx10، sox2، nestin و هم چنین مارکرهای سلول های عصبی شبکیه مانند rhodopsin و thy1 توسط روش های icc و real time pcr مورد بررسی قرار گرفتند. نتیجه گیری: بیان قوی مارکرهای pax6، chx10، sox2، nestin به عنوان مارکرهای پروژنیتوری و هم چنین بیان مارکرهای rhodopsin و thy1 به عنوان مارکرهای سلول های عصبی شبکیه مشاهده گردید. این نتایج نشان می دهد که بیش بیان ژن sox2 موجب باز برنامه نویسی و دگر تمایز سلول های rpe به سمت سولهای بنیادین و پروژنیتوری شبکیه می گردد. کلید واژه: سلول های rpe، sox2، باز برنامه نویسی، دگر تمایز